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酶联免疫法原理

[ 更新时间:2014-05-10 ]

简介

  酶联免疫吸附剂测定法 ,简称 酶联免疫法 ,或者 ELISA法 。
  它的中心就是让抗体与 酶复合物 结合,然后通过显色来检测。
 

步骤

 ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取 血清 。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品(这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育,然后洗板,加 底物 ,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。
 

基本原理

 ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其 免疫活性 。
  ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。
  ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:
  ①固相的抗原或抗体
  ②酶标记的抗原或抗体
  ③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。